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12孔板沙门定量板

Mini-MPN法定量检测样品中沙门氏菌试验操作指南

12孔板沙门氏菌定量

原理: 绝大多数沙门氏菌具有鞭毛,可以迁移运动,采用12孔微量板对样品进行增菌和培养,即3个重复4个连续稀释度,阳性结果经生化鉴定和血清学试验后,查MPN表对样品中沙门氏菌定量。

图片:

12孔板草图

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使用说明:本发明是一种沙门氏菌微量MPN检测方法,涉及利用微量培养基培养和鉴别沙门氏菌,并根据MPN方法进行样品中沙门氏菌快速定量/定性检测,属微生物培养与检测领域。通过改变培养基成份把传统的MPN检测方法中的多个实验单元整合在一起,利用12孔细菌培养板(4个梯度,3个重复)进行增菌、培养、检测,舍弃了传统的9管法,可迅速筛选出阳性样品,极大的减少了工作量,解决了传统沙门氏菌定量检测耗时长、工作量大的问题。能简便地检测出食品中沙门氏菌的含量,并且当食品中沙门氏菌含量较低时,具有很好的灵敏度。

Mini-MPN法定量检测样品中沙门氏菌试验操作指南:

1.        以无菌操作,称取样品25g 加入到225mL 前增菌液中,均质1min2 min,制成1:10 的样品稀释液。

2.        1ml1:10 的样品稀释液加入到9ml生理盐水试管中,混匀做成1:100稀释液,以此法做1:1000稀释液。

3.        无菌手续取10ml  1:10 的样品稀释液加入到3个无菌空试管中,共做3管(每管加入样品量为1g);此3管为第一列;从第一列的3管中每管取1ml 1:10 的样品稀释液加入到第二列39ml前增菌液试管中,每管加1ml,共做3管(每管加入样品量为0.1g);取1ml 1:100 的样品稀释液加入到第三列9ml前增菌液试管中,每管加1ml,共做3管(每管加入样品量为0.01g);取1ml 1:1000 的鸡肉样品稀释液加入到第四列9ml一步增菌液试管中,每管加1ml,共做3管(每管加入样品量为0.001g)。这样共做了4个稀释度,每个稀释度有3个重复。

4.        将上述袋子里剩余的216ml前增菌液和12管前增菌液放入36℃±1培养1820小时。

5.        将袋子里培养液划线于XLT4平板上,置于36℃±124小时,做定性; 定量用的12管培养液每管取20ul加入到分离培养基板子对应孔的左边,尽量接近培养基,不要戳破,不要沿管壁加。如果分离培养基表面水汽大,可以放在3642烘干表面水分再用(最好提前一天从冰箱中拿出放室温)。然后将分离培养基板子放在42℃±1培养24小时观察结果。

6.        分离培养基板子孔内培养基变红且有蔓延生长的为可疑阳性孔,用接种环在蔓延生长的最边缘取菌划线XLT4平板,每一个可疑孔划一块XLT4平板,置于36±1培养24小时观察结果

7.        XLT4平板上有黑心、粉红色、菌落周围有透明区域黑心、黄色菌落或粉红色无黑心的均为可疑菌落,挑取可疑菌落23个接种TSI琼脂斜面,36±1培养24小时,排除全管黄或全管红的,其余的均有沙门氏菌的可能性,如果TSI反应一样的,挑取1株最可疑株进行生化管鉴定(靛基质、pH7.2尿素、KCN试验和对照、赖氨酸试验和对照管),典型反应为靛基质-(加试剂后不变红)、pH7.2尿素-(不变红)、KCN试验-(清亮)和对照+(浑浊)、赖氨酸试验+(紫色)和对照管-(变黄)。

8.        血清学鉴定:生化鉴定为沙门氏菌的取TSI斜面的菌依次进行OMA-OMB-OMC-OMDHMA-HMB-HMC-HMD凝集,如果前面的血清凝集请在记录上记下结果,不再进行后面的血清凝集。

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图为  MSRV板子结果和XLT4划线结果

 
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